酵母双杂交是一种常用的蛋白质相互作用检测方法，通常用于筛选和鉴定潜在的蛋白质相互作用。在双杂交的过程中，我们常常会遇到一些问题，下面是关于酵母双杂交一对一互作验证的常见问题和解答：

1、如何构建酵母双杂交实验中使用的融合蛋白质？

通常可以利用基因克隆方法，将要检测的两个蛋白质的DNA序列逐步克隆到酵母双杂交的表达载体中，分别融合到DNA绑定域和激活域相关的蛋白质基础上，构建酵母表达融合蛋白的体系。

2、如何确定酵母双杂交实验的阴性和阳性对照？

阴性对照：PGADT7::RecT+PGBKT7::Lam；PGADT7+PGBKT7::目的蛋白；PGADT7::目的蛋白+PGBKT7。

阳性对照：PGADT7::RecT+PGBKT7::P53

3、如何解决酵母双杂交一对一验证实验中自激活现象？

设立阴性对照PGADT7+PGBKT7::目的蛋白与PGADT7::目的蛋白+PGBKT7这两种组合观察目的蛋白的自激活现象；如果出现自激活现象，我们会根据自激活现象的强弱以及出现的时间节点等来调整试验方案，确保交付结果的准确性以及非假阳性。