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蛋白-DNA互作:凝胶阻滞实验 EMSA

2023/6/7

凝胶阻滞实验(EMSA)原理示意图


凝胶阻滞原理简介

  凝胶阻滞(Electrophoretic mobility shift assay, EMSA)实验是体外分析DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。其原理为蛋白质与核酸分子结合后将大大增加其相对分子质量,而凝胶电泳中核酸的迁移率与其相对分子质量成正比,因此没有结合蛋白质的核酸片段跑得快,而与蛋白质结合形成复合物的核酸则跑得慢。


凝胶阻滞实验(EMSA)流程图


凝胶阻滞实验流程

  凝胶阻滞(Electrophoretic mobility shift assay, EMSA)实验是体外分析DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。其原理为蛋白质与核酸分子结合后将大大增加其相对分子质量,而凝胶电泳中核酸的迁移率与其相对分子质量成正比,因此没有结合蛋白质的核酸片段跑得快,而与蛋白质结合形成复合物的核酸则跑得慢。

  ①构建表达载体:目的基因克隆或目的基因合成;限制性内切酶酶切骨架载体并纯化;目的基因插入骨架载体;转化大肠杆菌,筛选阳性克隆并测序鉴定;
  ②转化表达菌株:将目的表达载体转化表达菌株;
  ③制备目的蛋白:诱导目的蛋白表达并提取纯化目的蛋白;
  ④进行凝胶阻滞(EMSA)实验;
  ⑤拍照记录实验结果。


凝胶阻滞技术服务范畴

  1、转录因子与启动子区域的结合验证
  2、蛋白-核酸复合体的形成
  凝胶阻滞技术服务优势:
  ①团队经验丰富;
  ②提供原始图片,保证数据真实可靠。