85

蛋白质免疫印迹(Western Blot)

2023/6/8

Western Blot原理示意图


原理简介

  Western Blot是一种用于分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质,然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上,再将膜与对应目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中,未结合的抗体被洗掉,只留下与目标蛋白质结合的抗体,最后通过显影胶片或荧光扫描来检测结合的抗体。由于抗体仅与目标蛋白质结合,因此看到的带一般就是目的条带,条带的粗细对应于蛋白质量。通过分析特定反应的位置和强度,可以获得目标蛋白在给定细胞或组织匀浆中的表达信息。
  由于凝胶电泳的高分辨率和免疫的强特异性和高灵敏度,Western印迹分析可检测低至1ng的靶蛋白。该方法广泛应用于分子生物学、生物化学、免疫遗传学等分子生物学领域。

服务流程

  ①细胞或者组织总蛋白提取;
  ②蛋白质定量;
  ③SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳;
  ④蛋白质转膜(硝酸纤维素或 PVDF);
  ⑤膜的封闭;
  ⑥一抗、二抗孵育;
  ⑦显影检测;
  ⑧数据分析,交付结果。


技术要求

  ①提供的细胞或者组织样品尽可能新鲜,组织块大于100 mg;细胞大于6×106;
  ②说明样品上样顺序信息;
  ③客户需要自备一抗,或者由本公司代购一抗;
  ④收到样品后7~10个工作日内向客户交付实验数据;


服务优势

  ①团队经验丰富;
  ②交付周期短,提供原始图片以及试验记录,保证数据真实可靠;
  ③本公司所用的电泳设备、一抗、二抗、显影液和显影仪都是进口的,确保实验的高灵敏度以及高特异性;
  ④可以检测pg级别的低浓度蛋白。