2023/6/8
▲ Western Blot原理示意图
Western Blot是一种用于分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质,然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上,再将膜与对应目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中,未结合的抗体被洗掉,只留下与目标蛋白质结合的抗体,最后通过显影胶片或荧光扫描来检测结合的抗体。由于抗体仅与目标蛋白质结合,因此看到的带一般就是目的条带,条带的粗细对应于蛋白质量。通过分析特定反应的位置和强度,可以获得目标蛋白在给定细胞或组织匀浆中的表达信息。
由于凝胶电泳的高分辨率和免疫的强特异性和高灵敏度,Western印迹分析可检测低至1ng的靶蛋白。该方法广泛应用于分子生物学、生物化学、免疫遗传学等分子生物学领域。
①细胞或者组织总蛋白提取;
②蛋白质定量;
③SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳;
④蛋白质转膜(硝酸纤维素或 PVDF);
⑤膜的封闭;
⑥一抗、二抗孵育;
⑦显影检测;
⑧数据分析,交付结果。
①提供的细胞或者组织样品尽可能新鲜,组织块大于100 mg;细胞大于6×106;
②说明样品上样顺序信息;
③客户需要自备一抗,或者由本公司代购一抗;
④收到样品后7~10个工作日内向客户交付实验数据;
①团队经验丰富;
②交付周期短,提供原始图片以及试验记录,保证数据真实可靠;
③本公司所用的电泳设备、一抗、二抗、显影液和显影仪都是进口的,确保实验的高灵敏度以及高特异性;
④可以检测pg级别的低浓度蛋白。