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蛋白互作:GST下拉实验(GST-pull down assay)

2023/6/7

▲ GST下拉实验(GST-pull down)技术原理示意图


GST下拉实验原理简介

  GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术,可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST(谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase)融合,使其与谷胱甘肽亲和树脂结合,然后在目的蛋白溶液过柱时,便可从中捕获与靶蛋白相互作用的目的蛋白,洗脱结合物后通过western blot分析,即可证实两种蛋白间的相互作用或筛选与之互作的蛋白。


GST下拉实验流程

  ①构建表达载体:目的基因克隆或目的基因合成;限制性内切酶酶切骨架载体并纯化;目的基因插入骨架载体;转化大肠杆菌,筛选阳性克隆并测序鉴定;
  ②转化表达菌株:将目的表达载体转化表达菌株;
  ③制备目的蛋白:诱导目的蛋白表达并提取目的蛋白;
  ④GST-pull down实验;
  ⑤Western Blot检测目的蛋白;
  ⑥拍照记录实验结果。


GST-pull down实验流程图


GST下拉实验结果展示



  GST下拉实验技术服务范畴:验证两个已知蛋白质间的相互作用
  技术服务优势:
  ①团队经验丰富;
  ②交付周期短,提供原始图片,保证数据真实可靠。